A Técnica de Ziehl-Neelsen é uma técnica de coloração de bactérias mais agressiva que a técnica de Gram. Ela é usada em bactérias que coram mal com o Gram, como os bacilos da Lepra e da tuberculose, entre outros.
PRINCÍPIO:
As micobactérias apresentam grande quantidade de lipídeos em suas paredes celulares. Isto faz com que estas bactérias submetidas a uma coloração por solução de fucsina, se impregnem pelo corante. Após uma descoloração por solução de álcool-ácido, elementos celulares e outra bactérias se descoram, mas as micobactérias mantêm a coloração. Após a coloração pela fucsina de Ziehl, procede-se à coloração de fundo com a solução de Azul de Metileno
REAGENTES E APRESENTAÇÃO:
Solução de Fucsina Fenicada a 0,3% ———– 500 mL
Solução de Álcool-Ácido a 3 % ——————– 500 mL
Solução de Azul de Metileno a 0,3 % ———— 500 mL
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES:
Os corantes deve ser mantido no frasco original, bem vedado, em temperatura ambiente e ao abrigo da luz.
CUIDADOS E PRECAUÇÕES:
As soluções corantes são para uso diagnóstico “in vitro”. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se o contato com a pele e mucosas. Em caso de contaminação acidental lavar a área afetada em água corrente. O descarte do material utilizado deve ser feito obedecendo-se os critérios de biossegurança estabelecidos pelo laboratório. Salvo as manchas provocadas pelos corantes, o produto não oferece risco ao meio ambiente ou pessoas, dentro das normas e condições de uso. Manter afastado do fogo e calor. AMOSTRAS:
Esfregaços feitos a partir de colônias bacterianas. Esfregaços de secreções das mais diversas parets do organismo. Esfregaços do sedimento urinário. Toda amostra biológica deve ser considerada como
PROCEDIMENTO TÉCNICO:
Fixar o esfregaço; Colocar as lâminas em suporte de coloração; Cobrir as lâminas com Fucsina de Ziehl; Aquecer as lâminas durante 5 minutos, permitindo a saída de vapores e evitando a fervura da fucsina; Após 5 minutos, escorrer e lavar as lâminas delicadamente com água; Descorar as lâminas com solução de álcool-ácido até que ela fique completamente clara; Lavar as lâminas com água corrente; Corar com Azul de Metileno por 1 minuto; Lavar em água corrente e secar.
RESULTADOS ESPERADOS
As bactérias ácool-ácido resistentes apresentam-se de cor avermelhada. As demais bactérias (não álcool- ácido resistentes), elementos celulares e detritos, coram-se em azul pela solução de azul de metileno.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO:
Repetitividade: foram realizados testes com o corante bacteriológico em 15 esfregaços de escarro de pacientes com tuberculose.Paralelamente 15 esfregaços de secreção de orofaringe foram corados com o corante. Observou-se que a repetitividade relaciona-se com o correto seguimento das instruções de uso, sendo decisiva as etapas de fixação, os tempos de coloração e a temperatura de aquecimento da fucsina. Reprodutividade: durante 6 meses consecutivos foram realizados testes em esfregaços de culturas de bacilos álcool-ácido resistentes, utilizando-se o mesmo lote do produto. Durante todo o período, houve concordância das características tintoriais dos bacilos BAAR e dos bacilos não álcool-ácido resistentes.
